产品货号：
M20032
中文名称：
Phi29 DNA聚合酶
英文名称：
Phi29 DNA Polymerase
产品规格：
125U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，在大肠杆菌表达后经多次纯化分离得到。Phi29 DNA Polymerase具有特殊的链置换活性和高效的连续合成特性，对模板有很强的结合能力，可连续合成多达70kb的DNA片段而不从模板上解离。同时该酶具有很强3'→5'外切酶校正功能，保真性比Taq DNA Polymerase高100倍。
30℃条件下，10min内能使0.5pmol的dNTPs掺入酸不溶性物所需要酶量定义为1个活性单位。
| 组分 | 规格 |
| Phi29 DNA聚合酶(10U/μL) | 12.5μL |
| 10×Phi29 Buffer | 1mL |
| 100×BSA | 200μL |
| dNTPs (10mM each) | 200μL |
保存：-20℃，有效期1年。
- 本制品灵敏度极高，注意防止模板污染。
- Phi29 DNA聚合酶具有极强的3'→5'外切酶活性，能够降解引物，扩增反应中应使用经过硫代修饰的随机引物。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
测序质粒模板的制备：
- 样品处理：在平板上挑取单克隆到10μL无菌水中，取1μL进行反应。
- 样品预变性与质粒扩增：按照反应体系，先进行预变性，并使引物与质粒进行退火，加入其它成分后30℃扩增过夜。常用反应体系如下(50μL体系)：
成分 用量 10×Phi29 Buffer 5μL 随机引物(1mM) 1.25μL 菌液或质粒模板(5～10ng/μL) 1μL 加ddH2O至44.5μL，95℃预变性5min，立即冰浴5min。 dNTPs (10mM each) 2.5μL 100×BSA 0.5μL Phi29 DNA聚合酶(10U/μL) 2.5μL - 扩增效果检测(可选步骤)：将扩增产物稀释后进行琼脂糖凝胶电泳，如存在合适的酶切位点，可进行酶切反应检测。
- 热失活：65℃，10min。
- 测序反应：取上述反应液2μL加8μL无菌水，即可用于直接测序。
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